换一批PDZ1-腺病毒重组体的构建及其对KA诱导的海马神经元凋亡的拮抗作用
Construction of recombinant Ad-PDZ1-GFP and its antagonistic effects on kainic acid-induced apoptosis of hippocampl neurons
摘要目的 构建PSD-95结构域PDZ1与腺病毒重组体并观察其对海人藻酸(KA)诱导的海马神经元凋亡的作用.方法 采用RT-PCR法获得PDZ1的cDNA;与腺病毒穿梭载体pAdTraek-CMV用T4 DNA连接酶连接;连接产物与骨架载体pAdEasy-1共转染至原核包装细胞BJ5183;将原核重组体用脂质体转入真核包装细胞293H;纯化包装后的病毒颗粒并测定其滴度;腺病毒感染培养的海马神经元,加入KA,用DAPI染色后荧光显微镜观察细胞凋亡;用流式细胞仪定量分析细胞凋亡率.结果 ①经RT-PCR得到了PDZ1的cDNA;②电泳鉴定得到原核重组体;③得到包装完整的具感染能力的病毒颗粒;④纯化的病毒颗粒滴度为1.08×109 ifu/mL⑤病毒表达的PDZ1使KA诱导的海马神经元凋亡数量减少(P<0.05).结论 获得了能表达PDZ1-GFP的病毒颗粒,并且PDZ1过表达能拮抗KA诱导的海马神经元凋亡.
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2009-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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