换一批CFSE标记结合流式细胞术在研究NK细胞分裂与杀伤功能中的应用
Establishment of CFSE labeling method coupling with flow cytometry used in the study of human NK cell function
摘要目的 建立并优化CFSE标记结合流式细胞术检测人NK细胞分裂、增殖和杀伤功能的方法.方法 利用CFSE标记磁珠纯化的人NK细胞,加或不加IL-2进行培养.分别在第3、5、7天收集细胞,流式细胞术对NK细胞的分裂增殖进行检测;利用IL-2活化NK细胞作为效应细胞,与靶细胞(K562细胞)按不同效靶比在37℃5%CO_2培养箱共孵育4 h加入碘化丙啶(PI),流式细胞术检测CFSE~+PI~+K562细胞(死亡的靶细胞)的百分率.结果 CFSE标记的NK细胞在IL-2的作用下第5天即可观察到细胞增殖,至第7天80%以上的NK细胞均发生增殖,分裂1～6次.在对NK细胞杀伤功能的研究中,发现IL-2刺激后NK细胞的杀伤功显著增强.此外,当IL-2或IL-12活化的NK细胞作用于不同的靶细胞时,均可有效地杀伤靶细胞.结论 以CFSE标记技术结合流式细胞术可在单细胞水平客观精确地对NK细胞的增殖、分裂和杀伤功能进行分析.本方法灵敏度高、操作简便易行、重复性好,对其他淋巴细胞亚群功能的研究具有重要的借鉴意义.
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