基于DNA四面体HCR信号放大纳米体系的活细胞内circRNA检测与生物成像
Detection and imaging of circRNA in living cells based on DNA tetrahedron HCR signal amplification nanosystem
摘要鉴于可靠生物标志物对早期诊断、治疗和预后评估疾病的关键作用,且现有研究证实circRNA具备成为潜在诊断与预后生物标志物的重要价值.本研究构建了一种基于DNA四面体的信号放大纳米体系(DTNH),该体系利用杂交链式反应(Hybridization Chain Reaction,HCR)进行信号放大,实现对活细胞中circRNA的检测及生物成像.HCR作为一种无酶、等温的信号放大技术,原理是通过目标物触发两个稳定的DNA发夹(H1和H2)发生交替、自持续的级联杂交反应,进而形成长双链DNA聚合物.基于此原理构建的DTNH由两种功能化的DNA四面体探针(DTNH-1和DTNH-2)构成.通过荧光法得出DTNH展现出优异的灵敏度和选择性,检测限为1.2×10-11mol/L.同时,DTNH具有良好的生物相容性,凭借独特的纳米结构优势,能进入细胞,并成功用于活细胞内circMTO1的成像研究.开发的纳米体系不仅能动态监测细胞内circMTO 1的表达水平,还可区分肿瘤细胞和正常细胞,同时为揭示circRNA空间表达特征提供了新方法,有望为开发精准高效的肿瘤诊断平台奠定一定基础.
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