换一批半巢式聚合酶链反应-微孔板杂交法检测沙眼衣原体
Application of Semi-nested Polymerase Chain Reaction in Detection of Chlamydia Trachomatis
摘要目的应用半巢式聚合酶链反应-微孔板杂交法(半巢式PCR-MPH)检测泌尿生殖道沙眼衣原体(Ct). 方法分别用质粒和主要外膜蛋白基因引物进行扩增.将下游引物用生物素标记,经半巢式PCR扩增Ct主要外膜蛋白基因后,扩增产物被包被有链霉亲和素的微孔板捕获,经碱变性后与标有荧光素的特异性探针进行杂交.然后通过辣根酶标记的抗荧光素抗体与杂交分子反应,经过酶底物显色,通过测定吸光度来判断结果. 结果主要外膜蛋白基因引物半巢式PCR较质粒引物PCR更敏感,比半巢式PCR产物酶切后电泳法高10倍 ,半巢式PCR-MPH法特异性强.该法重复法好,批内CV值<10%,批间CV值<15%;该法在包被浓度为4 mg/L、产物1∶20稀释、与微孔板结合20 min后加入10 pmol/mL探针杂交30 mi n, 用1∶3 000稀释的酶显色条件下有最佳结果. 结论该法操作简便、敏感性和特异性均高 ,无放射性和EB染料污染,适于临床样本的常规检测.
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医学主题词
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction)沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)性(Sex)外膜(Adventitia)蛋白(Egg White)
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.2095-1116.2002.02.017
发布时间
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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