换一批肠出血性大肠杆菌O157∶H7的快速可视化检测
A quicker and visual method for detecting Enterohemorrhagic Escherichia coli O157∶H7
摘要目的 应用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术和羟基萘酚蓝(Hydroxynaphtholblue,HNB)指示剂建立肠出血性大肠杆菌(EHEC) O157∶H7快速可视化检测方法.方法 针对EHEC O157∶H7脂多糖编码基因rfbE保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入染料HNB作为LAMP扩增的指示剂,结合LAMP浊度仪优化扩增条件,根据HNB的颜色变化进行结果判定,并评价检测方法的特异性和灵敏度.结果 本方法最低检出限约为100拷贝/反应管,高于普通PCR;检测特异性高,仅EHEC O157∶H7反应管HNB颜色由紫罗兰变成天蓝色,而肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠聚集性大肠杆菌(EAEC)、宋内志贺菌、福氏志贺菌均不发生变色反应；体系的扩增效率高于普通PCR,40 min内出结果.结论 建立的基于颜色判定的EHEC O157∶H7 LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于EHEC O157∶H7现场快速检测.
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关键词
肠出血性大肠杆菌O157∶H7可视化检测环介导等温扩增羟基萘酚蓝enterohemorrhagic Escherichia coli O157∶H7visual detectionloop-mediated isothermal amplification (LAMP)hydroxynaphthol blue (HNB)
医学主题词
肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)方法(Methods)敏感性与特异性(Sensitivity and Specificity)色(Color)肠(Intestines)
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1672-271X.2013.04.001
发布时间
2013-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
江苏省科技支撑计划社会发展项目（BE2012609）
国家传染病防治科技重大专项（2013ZX10004-103、2013ZX10004-218）
军区重点项目（10Z038、10Z040）
全军后勤科研重大项目(十二五)（AWS11C001、AWS11C009）
军区重点项目（11Z040）
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