换一批过表达 C3 aR 人足细胞的构建及鉴定
Construction and identification of a human podocytes strain over-expressing C3aR
摘要目的：构建过表达C3a受体（C3aR）的肾小球足细胞株，为探讨C3aR在肾小球足细胞中的确切生理和病理意义提供细胞模型。方法设计合成人C3aR 表达单元，将其克隆到慢病毒表达载体pLenti6．3-MCS-IRES2-EGFP的多克隆位点，构建成C3aR表达载体pLenti6．3-C3aR-IRES2-EGFP；将pLenti6．3-C3aR-IRES2-EGFP和包装质粒共转染293 T细胞，包装成C3aR表达重组慢病毒LV-C3aR；以LV-C3aR感染人肾小球足细胞系HPC，根据LV-C3aR上带有杀稻瘟菌素抗性基因的特点，以杀稻瘟菌素筛选稳定转染细胞克隆；利用荧光定量PCR和细胞免疫化学分析方法对稳定转染细胞克隆的C3aR表达水平进行分析，从中鉴定出稳定过表达C3aR的人肾小球足细胞株。结果成功构建了C3aR表达载体pLenti6．3-C3aR-IRES2-EGFP；得到了高滴度的C3aR表达重组慢病毒LV-C3aR；成功构建了过表达C3aR的人肾小球足细胞株HPC-C3aR。结论成功构建C3 aR表达载体和过表达C3 aR的人肾小球足细胞株，为进一步研究C3 aR过表达在人肾小球足细胞中的病理意义提供了很好的细胞模型，也为进一步开展C3 aR在其他细胞中的生理、病理意义创造了条件。
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分类号
R363.1
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1672-271X.2014.06.02
发布时间
2015-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金项目（81370828）
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