换一批
换一批GLP-1-Fc融合蛋白在DG44细胞中的表达及其质量分析
Experession of human GLP-1-Fc fusion protein in DG44 cells and its bioactivity analysis
摘要构建GLP 1 Fc蛋白真核表达载体,并在DG44细胞株中实现表达.利用基因工程等方法构建表达GLP 1 Fc融合蛋白的重组DG44细胞株,通过甲氨喋呤的加压筛选及有限稀释法挑选出表达量较高的单克隆细胞株,经无血清驯化培养获得悬浮生长的细胞株.收集发酵培养上清,通过离心、过滤及亲和层析等方法对目的蛋白GLP 1 Fc进行分离纯化,并利用Dot blot、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳、高效液相色谱法、Edman降解等方法进行目的蛋白的质量分析,以建立GLP 1 Fc融合蛋白发酵、纯化工艺,探索该融合蛋白的质量检测方法.本实验成功构建了表达GLP 1 Fc融合蛋白的重组DG44悬浮型细胞株,通过该工艺流程,GLP 1 Fc融合蛋白表达量达到400 mg/L,纯度达95%,分子量约为30×104.该生产工艺能够获得与理论目标蛋白相一致的、且结构稳定GLP 1 Fc融合蛋白,其质量检测方法稳定可靠.
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