腺病毒介导的RNA干扰降低VEGF受体FLT-1,KDR转录抑制血管形成
Knockdown of FLT-1,KDR by Adenovirus-Delivered Small Interfering RNA Inhibits Angiogenesis
摘要本研究用细菌内同源重组的方法构建了针对VEGF受体FLT-1,KDR的siRNA表达重组腺病毒AdH1-siRNA/FLT-1和AdH1-siRNA/KDR,感染HUVEC细胞,观察两种病毒对HUVEC细胞体外增殖和形成微血管的干扰作用.通过RT-PCR实验表明, AdH1-siRNA/FLT-1和AdH1-siRNA/KDR均可特异性地下调血管内皮细胞(HUVEC)中的 FLT-1mRNA 和 KDR mRNA 水平.与对照组相比,FLT-1的 mRNA 水平下降为40%,KDR 的mRNA水平下降为52%. AdH1-siRNA/FLT-1和AdH1-siRNA/KDR对HUVEC细胞增殖均有干扰作用,加入病毒9 d后,对照组的细胞平均计数为31.5×104/μL,AdH1-siRNA/FLT-1干扰病毒对照组为28×104/μL,AdH1-siRNA/KDR干扰组为21.5×104/μL. AdH1-siRNA/FLT-1和AdH1-siRNA/KDR对HUVEC细胞在Matrigel上形成微血管均有干扰作用,对照组每HPF形成微血管数量为10.75条,AdH1-siRNA/FLT-1干扰病毒对照组为10.25条,实验组AdH1-siRNA/KDR每HPF形成微血管数量为7条.证明AdH1-siRNA/FLT-1,AdH1-siRNA/KDR均可干扰血管形成.
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