换一批枯草芽孢杆菌醛缩酶的克隆表达、纯化、酶学性质研究及应用
Expression, Purification, Biochemical Characterization and Application of Recombinant Bacillus subtilis Aldolase
摘要果糖-1,6二磷酸醛缩酶是糖酵解途径中的关键酶,可催化果糖-1,6二磷酸(FDP)分解成磷酸二羟丙酮(DAP)和三磷酸甘油醛(G3P)的可逆反应.本文首次克隆枯草芽孢杆菌中的果糖-1,6二磷酸醛缩酶基因(fba),构建原核重组表达载体,利用Ni-NTA柱对重组枯草芽孢杆菌果糖-1,6二磷酸醛缩酶(FBA)进行分离纯化和酶学性质研究,构建表达载体pET28a(+)-fba转化入BL21(DE3)宿主内,在30℃下诱导表达,通过SDS-PAGE检测FBA纯度和分子量,FBA分子量约为35 kDa.最适反应条件为pH 7.5、35℃,金属离子K+、Na+、Fe2+对该酶有较好的激活作用,而Zn2+、Mn2+、Ca2+、Mg2+对该酶有一定的抑制作用.基于FBA可专一性分解FDP的基本原理,建立了快速、准确测定酵母发酵液中FDP含量的单酶法.通过单酶法测定FDP含量的样品回收率为99.54％,相对标准偏差为0.427％,测定结果基本不受样品中其他成分干扰.T检验结果表明,单酶法和多酶法对发酵液中FDP含量的检测结果无显著差异,与紫外分光光度法测定的结果存在显著差异,这说明单酶法可以准确测定发酵液中FDP的含量.单酶法测定FDP含量具有快速、准确、灵敏的特点,不仅适合于成分复杂的发酵液中FDP含量的测定,也具有广泛的应用价值.
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分类号
Q819（生物工程应用）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1001-4616.2017.02.013
发布时间
2017-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
江苏省科技厅前瞻性研究项目（(BY2013001-03)）
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