换一批miRNA-140过表达腺病毒载体的构建及鉴定
The construction and identification of an adenoviral vector expressing mature miRNA-140
摘要目的:构建稳定表达成熟miRNA-140腺病毒表达载体.方法:从人类基因组中扩增出带有酶切位点的miRNA-140目的基因,将目的基因连接到穿梭质粒pDC316-mCMV-EGFP,进一步将带有目的基因的穿梭质粒重组到骨架质粒AdEasy,并将重组质粒转染到AAV-293细胞中包装成腺病毒载体,经过二次扩增之后获得高滴度的腺病毒,并且检测其包装效率及感染滴度.最后,用目的腺病毒感染骨肉瘤细胞,通过荧光定量PCR方法检测miRNA-140表达情况.结果:酶切鉴定和测序结果均表明,miRNA-140成功克隆入pDC316-mCMV-EGFP载体中.与AdEasy重组后,包装纯化具有感染性的腺病毒miRNA-140,通过荧光定量PCR检测,软骨肉瘤细胞中miRNA-140升高4.2±0.2倍.结论:成功构建了成熟miRNA-140的腺病毒表达载体.
更多相关知识
关键词
miRNA-140AdEasy系统荧光定量PCR骨肉瘤细胞miRNA-140AdEasy systemquantitative polymerase chain reactionosteosarcoma cells
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1671-6264.2016.01.002
发布时间
2016-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
深圳市科技计划（201003462）
- 浏览0
- 被引4
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
