换一批
换一批SynGAP(1-700aa)中670-685aa缺失突变质粒的构建及表达
Construction and expression of SynGAP (1-700aa) plasmid mutanted deletion at 670-685aa residues
摘要目的:缺失突变SynGAP(1-700 aa)-Flag中的670-685aa片段,为后续实验中新的药物靶点的鉴定提供可靠理论依据.方法:以前期构建好的pCMV-SynGAP (1-700aa)-Flag质粒为模板,重叠延伸PCR技术缺失突变670-685aa片段,扩增出目的片段;限制性内切酶将载体线性化,然后分别纯化目的片段与线性化载体;利用同源重组技术连接目的片段与线性化载体,获取重组质粒;PCR技术鉴定重组质粒构建成功,测序进一步验证质粒碱基正确;将质粒转入293T细胞,免疫印迹鉴定能否成功表达.结果:重叠PCR成功缺失突变670-685aa片段,成功构建重组质粒,且测序正确.免疫印迹结果表明,SynGAP (1-700aa)缺失突变670-685aa片段后仍可成功表达.结论:成功缺失突变SynGAP(1-700aa)中的670-685aa片段,并且在细胞株中稳定表达.该质粒的成功构建,为我们的后续研究奠定实验基础.
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分类号
Q782
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1671-6264.2016.06.002
发布时间
2017-01-17
基金项目
国家自然科学基金青年项目
江苏省高校自然科学基金面上项目
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