冻融循环对肝癌新鲜冻存组织RNA完整性的影响

Effects of freeze-thawing cycles on RNA integrity in fresh frozen liver tumor tissue

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摘要目的:评估新鲜冻存组织解冻后RNA降解动力学变化,探讨反复冻融对肝癌组织样本质量的影响.方法:将15例肝癌患者术后组织标本各分11份,其中1份用于组织形态学验证,另外10份于-80℃保存,取4份标本分别在冻融0、1、3、6次后提取RNA,剩余6份标本分别在室温下放置0 min(T0)、5 min(T5)、15min(T15)、30 min (T30)、45 min(T45)及1 h(T60)后进行RNA提取,采用微芯片凝胶电泳技术分析RNA完整性.结果:切片中肿瘤组织面积均超过85％,坏死组织面积均小于15％,符合国际肿瘤基因组联盟制定的标准,且与术后病理学结果符合率达100％.不同冻融次数组织RNA完整性(RNA integrity number,RIN值)比较,差异有统计学意义(P ＜0.001),而且冻融次数越多,RIN值越低(冻融循环0、1、3、6次后RIN分别为8.27 ±0.42、6.38±0.61、5.08 ±0.61、4.32±0.62).随解冻后RNA提取时间的延长,RNA完整性也不断降低(T0:RIN =8.33±0.52;T5:RIN=7.95±0.48;T15:RIN=7.09±0.40;T30:RIN=5.88±0.39;T45:RIN=5.06 ±0.39;T60:RIN =4.40±0.30),与T0时提取RNA比较,解冻后T30、T45、T60后提取RNA的RIN平均值显著下降,且差异有统计学意义(P＜0.001).结论:当研究对RNA质量要求比较高时,肝癌组织解冻不应超过3次,并且在30 min内提取RNA,以保证RNA的完整性.