换一批卡波济肉瘤相关疱疹病毒包膜糖蛋白K8.1B全长cDNA的克隆及在真核细胞中的表达
Cloning of glycoprotein K8.1B cDNA of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus and its expression in the eukaryotic cells
摘要目的:分离、克隆卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白K8.1B全长cDNA,并将其置于真核细胞中进行表达.方法:用K8.1B基因设计一对PCR引物,其5'端分别引入BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点.以佛波酯(TPA)刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总RNA为模板,通过RT-PCR扩增KSHV K8.1B编码序列,经双酶切后克隆进pcDNA3.1(+)载体中,构建含K8.1B cDNA的重组真核表达质粒.重组质粒经酶切鉴定、核酸序列测定和分析后转染人胚肾293细胞,经G418筛选获细胞克隆.用间接免疫荧光染色(IFA)检测K8.1B cDNA编码蛋白在293细胞中的表达状况.结果:RT-PCR分离、克隆的K8.1B cDNA全长501 bp,核酸序列分析显示,该基因与Genbank中已登记的K8.1B编码基因呈现100%同源性.经IFA证实该重组蛋白为KSHV K8.1B特异性蛋白.结论:KSHV包膜糖蛋白K8.1B编码cDNA在293细胞中获得了正确表达.
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DOI
10.3969/j.issn.1007-4368.2005.09.002
发布时间
2005-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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