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应用BSP联合TA克隆测序检测胰腺癌中RASSF1A基因启动子区异常甲基化

The abnormal methylation of RASSF1A in pancreatic cancer detected by bisulfite genomic sequencing PCR combined TA clone sequencing technology

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摘要目的:检测Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)在胰腺癌细胞株中的甲基化和表达状态,探讨其启动子异常甲基化在胰腺癌发病过程中的作用.方法:采用重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite genomic sequencing PCR,BSP)联合TA克隆测序检测胰腺癌细胞株PANC-1及胰腺癌组织、癌旁组织及正常胰腺组织中RASSF1A启动子区CpG岛的甲基化状态,以甲基化酶抑制剂5-aza-2-deoxycitydine(5-aza-dC)处理PANC-1,观察处理前后甲基化率变化情况,逆转录PCR观察RASSF1A的mRNA表达情况.结果:在PANC-1细胞中RASSF1A启动子的甲基化率平均为100.00％,在正常胰腺、癌旁及癌组织中平均分别为1.79％、93.75％和100.00％,与正常胰腺组织相比,胰腺癌旁及癌组织的RASSF1A启动子甲基化率明显增高(P＜0.01),而癌旁及癌组织之间无明显差异(P＞0.05).在PANC-1细胞、胰腺癌组织及癌旁组织中RASSF1A基因无表达,在正常胰腺组织中RASSF1A基因呈阳性表达；PANC-1细胞经5-aza-dC处理后,RASSF1A的甲基化率下降(88.89％,P＜0.05),mRNA表达无变化.结论:胰腺癌细胞株PANC-1及癌组织、癌旁组织RASSF1A基因表达与启动子区甲基化状态有关,启动子区的高甲基化导致PANC-1中RASSF1A基因的表达沉默.该基因异常甲基化有望成为胰腺癌的早期诊断指标和治疗靶点.

作者彭泉 ^[1] 张立洁 ^[2] 蔡辉华 ^[3] 高文涛 ^[3] 赵成功 ^[4] 钱祝银 ^[3] 苗毅 ^[3] 学术成果认领

作者单位南京医科大学第一附属医院普外科,江苏南京210029;解放军第105医院普外科,安徽合肥230032 ^[1] 解放军第105医院肿瘤科,安徽合肥,230032 ^[2] 南京医科大学第一附属医院普外科,江苏南京,210029 ^[3] 解放军第105医院普外科,安徽合肥,230032 ^[4]

关键词胰腺癌甲基化 Ras相关区域家族1A 重亚硫酸盐测序PCR TA克隆

医学主题词甲基化(Methylation)胰腺肿瘤(Pancreatic Neoplasms)组织(Tissues)基因(Genes)癌(Carcinoma)

分类号 Q756（分子遗传学）

栏目名称

临床医学

发布时间 2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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