换一批基于CRISPR/Cas9技术建立敲除OSBPL2基因的HeLa细胞株
Engineering an OSBPL2 gene knock-out HeLa strain by CRISPR/Cas9 technology
摘要目的:利用CRISPR/Cas9技术构建OSBPL2基因敲除的稳定HeLa细胞株.方法:设计3个单导向RNA(singleguide RNA,sgRNA),分别靶向OSBPL2基因的第2、3和5外显子,以PGK1.1为载体,构建出3个重组真核表达载体.分别转染HeLa细胞后,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,CruiserTM敲除检测实验和测序共同检验载体靶向效率.选出靶向效率最高的质粒转染HeLa细胞,进行单克隆细胞培养,最后用Western blot鉴定敲除效果.结果:sgRNA正确插入到PGK1.1载体,靶向第2外显子的重组载体转染HeLa细胞并筛选单克隆后,细胞未检测出OSBPL2蛋白的表达.结论:敲除OSBPL2基因的稳定HeLa细胞株构建成功.
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