换一批摘要目的:建立一种基于CRISPR/Cas13a的TP53 R248W变异体的快速检测技术.方法:根据Over-lap PCR技术,以TP53野生型质粒为模板构建TP53 R248W变异体质粒;对TP53R248W变异体扩增产物大小,扩增反应条件及crRNA长度和浓度进行优化,初步建立基于CRISPR/Cas13a的R248W变异体快速检测方法;利用不同突变率TP53 R248W变异体及模拟血浆ctDNA,评价CRISPR/Cas13a方法的检测灵敏度.结果:建立的CRISPR/Cas13a方法成功检测出产物大小为368 bp的TP53 R248W片段;在0.05～0.25 μmol/L浓度范围内,crRNA浓度越高,检测结果相对荧光值越高;该方法检测TP53 R248W变异体的灵敏度为1×104拷贝/μL,最低可以检测出突变率为0.01％的变异体.结论:建立的CRISPR/Cas13a方法具有快速、简便、灵敏、特异等优点,为组织和血浆中的TP53 R248W变异体的检测提供了新的技术手段.
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