换一批
换一批摘要目的:探究肾脏病相关生长抑制特异性基因6(growth arrest specific 6,Gas6)与肾脏疾病、凋亡的相关关系.研究转录因子AP-2a(transcription factor AP-2 alpha,TFAP2A)对基因Gas6的影响及其机制.方法:构建阿霉素肾病细胞模型,检测该模型中Gas6的表达变化;用Gas6蛋白刺激MPC5细胞,检测肾病相关指标的表达变化.用Gas6蛋白干预HEK-293T细胞,检测细胞凋亡率或凋亡相关指标的表达变化.构建Gas6启动子片段的萤光素酶基因报告重组质粒,检测Gas6基因启动子片段在HEK-293T细胞中的活性,预测Gas6启动子区的功能性转录因子结合位点并验证,在HEK-293T细胞中敲低或过表达TFAP2A后检测Gas6启动子片段活性、mRNA表达、蛋白表达的变化.结果:Gas6在阿霉素肾病细胞模型中高表达,且过量的Gas6可诱导MPC5细胞中肾病相关指标Nephrin和Podocin与阿霉素肾病细胞模型趋势相同.与对照组相比,Gas6蛋白组的细胞凋亡明显减少.成功构建有活性的Gas6基因启动子片段萤光素酶基因报告重组质粒,且在此片段内含有TFAP2A的结合位点.TFAP2A可在启动子、mRNA及蛋白水平对Gas6正向调控.结论:Gas6对肾病综合征的发生有促进作用,Gas6在HEK-293T细胞中有抗凋亡作用,TFAP2A对Gas6有正向转录调控作用.
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