换一批
换一批双峰驼天然单域抗体库的构建及鉴定
Construction and Identification of Natural Single Domain Antibody Library of Bactrian Camel
摘要重链抗体的可变区VHH是目前天然存在的具有完整功能的最小抗体分子片段,该抗体在基础研究、药物开发等领域应用前景极为广阔.为了构建双峰驼天然单域抗体库并对其进行初步鉴定,从5峰未经免疫的健康骆驼全血中分离淋巴细胞,提取其总RNA,之后反转录为cDNA,利用PCR技术扩增全套编码重链抗体可变区的基因序列,将经过回收并酶切纯化的VHH序列克隆到噬菌体载体上,电转化大肠杆菌TG1感受态细胞,共转化343次.结果表明,构建的双峰驼天然单域抗体库库容为4.4×107,转化阳性率为75%,多样性良好,体现为CDR3区碱基序列及长度存在显著差异.成功地构建了双峰驼天然单域抗体库,为今后从中筛选出具有应用价值的特异性单域抗体奠定了基础.
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