颅缝与非颅缝处未成熟硬脑膜成骨基因在颅缝闭合过程中差异性表达的研究
The Study of Differential Gene Expression in Immature Dural Osteogenesis at Cranial Sutures versus Non-Suture Sites During the Process of Cranial Suture Closure
摘要目的 通过探讨颅缝与非颅缝处硬脑膜成熟过程中基因差异表达的规律,以及硬脑膜调节颅缝发育过程中的作用及其调控分子机制,以期为颅骨发育异常疾病的治疗策略提供实验依据.方法 取10日龄SD大鼠,分为两组,分别为原位组、旋转组,每组60只,共120只.以人字缝为圆心,0.5 cm为半径分离颅骨,原位组的颅骨分离后原位覆盖,旋转组的颅骨分离后旋转180°覆盖.饲养3周后处死,HE染色观察颅缝闭合情况;利用二代测序检测两组中mRNA表达差异,进行生物信息分析.采用RT-qPCR及West-ern-blot 方法对差异表达较高的基因进行验证.结果 (1)HE染色结果:在术后3周时,旋转组相较于原位组的颅缝处的骨胶原纤维组织增厚并有向骨组织间隙内生长的趋势.(2)二代测序结果:通过生物信息学技术对原位组和旋转组的硬脑膜及骨组织的差异表达基因进行分析发现,上调基因主要参与神经递质的传递和运输以及细胞对外界生物刺激的应答反应等生物学过程.进一步的功能富集分析表明,cAMP信号通路在差异表达基因中呈现显著富集.(3)相关基因验证发现,cAMP信号通路表达量在非颅缝处下方硬脑膜较普通颅骨下方硬脑膜升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 颅缝处与非颅缝处硬脑膜基因表达存在差异,二代测序结果显示非颅缝处硬脑膜cAMP信号通路表达量升高,此通路可能是硬脑膜调控颅缝闭合的重要细胞信号通路.
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