换一批
换一批摘要目的:PCR扩增得到新基因ZNFD(Znf domain containing protein),构建pET32a-ZNFD原核表达载体,诱导蛋白表达及制备多克隆抗体.方法:通过PCR的方法克隆新基因ZNFD,选取部分抗原免疫原性较高的部分ORF序列,克隆到原核表达载体pET32a上,利用大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)表达系统表达ZNFD融合蛋白.纯化目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体.通过琼脂糖双向扩散实验和Western blot鉴定其效价和特异性.结果:经测序鉴定已成功克隆ZNFD基因.通过构建原核表达载体pET32a-ZNFD,在大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)中使用IPTG诱导表达,得到相对分子质量约为45 kD的融合蛋白.纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强的免疫特异性.结论:得到纯化的ZNFD蛋白,制备的多克隆抗体达到了一定的效价,且具有高特异性,为进一步研究ZNFD的功能奠定了实验基础.
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分类号
R394.3
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1674-7887.2008.03.001
发布时间
2008-07-01
基金项目
国家自然科学基金（30700826）；
苏州大学校科研和教改项目
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