清脂护肝方抑制HepG2细胞脂质沉积的研究
The research of the mechanism of improving HepG2 cell steatosis by Qingzhi Hugan prescription
摘要目的:探讨清脂护肝方含药血清对HepG2细胞脂质沉积的影响及可能的作用机制.方法:0.5 mmol/L油酸︰棕榈酸(2︰1)诱导HepG2细胞建立脂肪变性细胞模型,分为空白对照组、模型组、中药血清组(3个浓度:10%、20%、40%)、对照血清组(3个浓度:10%、20%、40%),分别进行细胞培养,油红O染色观察不同组别、不同浓度血清对HepG2细胞脂质沉积的影响,筛选出作用明显的血清浓度再次进行培养,测定细胞的三酰甘油水平,反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)试验检测脂肪酸合成酶(fatty acid syntherase,FASN)、脂肪酸氧化关键酶肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(carnitine paimitoyltransferase 1A,CPT1A)、羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(hydroxymethylglutaryl CoA reductase,HMGCR)、固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding transcription factor,SREBF)、过氧化物酶增殖物激活受体α(peroxisome proliferator activated receptor alpha,PPARα)的mRNA水平.结果:(1)0.5 mmol/L油酸︰棕榈酸(2︰1)可成功诱导建立HepG2细胞脂肪变性的模型;(2)油红O染色观察提示20%、40%浓度的清脂护肝方血清可改善脂肪变性HepG2细胞的脂质沉积,40%浓度的效果尤为显著;(3)40%中药血清组三酰甘油水平[(0.077±0.006)mmol/gprot]明显低于模型组[(0.172±0.016)mmol/gprot](P<0.01);(4)模型组细胞的FASN、HMGCR、SREBF的mRNA水平较空白对照组升高,CPT1A、PPARα的mRNA水平较空白对照组降低(P<0.05);40%对照血清组各指标的mRNA水平与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05);40%中药血清组FASN、HMGCR、SREBF的mRNA水平明显低于模型组(P<0.05),CPT1A、PPARα的mRNA水平与模型组差异无统计学意义(P>0.05).结论:清脂护肝方药物血清可减轻脂肪变性的HepG2细胞的脂质沉积,可能是通过下调FASN、HMGCR、SREBF的mRNA水平而实现.
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