细粒棘球蚴95抗原在真核昆虫表达系统中表达、纯化及免疫原性初步分析
Expression and Purification of Recombinant Protein Echinococcus Granulosus 95 in Eukaryotic Insect Expression System and the Preliminary Analysis on its Immunogenicity
摘要目的 采用真核昆虫表达系统表达细粒棘球蚴95(Eg95)抗原,探讨其免疫原性.方法 从GeneBank 获取Eg95基因序列(序列编号:EU595937.1),合成开放读码框(CDS)全长基因;利用杆状病毒表达系统Bac-to-Bac symtem在昆虫细胞中表达目的基因Eg95,亲和层析纯化,Western blot鉴定;对Balb/c小鼠分别免疫接种重组昆虫表达目的蛋白Eg95(简称eu rEg95)、原核重组表达Eg95(简称pro rEg95)、阴性对照PBS,制备免疫血清,间接法ELISA对各组特异性IgG抗体进行分析.结果 合成Eg95基因CDS全长471 bp,经测序与理论完全一致;Western blot证实目的蛋白通过重组杆状病毒在昆虫细胞内实现可溶性表达;ELISA结果表明:eu rEg95能够诱导产生原头蚴特异性IgG抗体,抗体水平高于pro rEg95组(P<0.05).结论 利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达出具有良好免疫原性的Eg95抗原,为优化细粒棘球蚴疫苗奠定基础.
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