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黑枸杞花青素通过Wnt/β-catenin信号通路改善人脂肪源性血管外膜细胞氧化损伤支持造血干/祖细胞体外扩增的研究

Study on Improving Oxidative Damage of Human Adipose-derived Pericytes/Perivascular Cells and Supporting the Expansion of Hematopoietic Stem/Progenitor Cells in Vitro by Anthocyanins from Lycium Ruthenicum Murr through Wnt/β-catenin Signaling Pathway

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摘要目的探讨黑枸杞花青素(ALRM)通过Wnt/β-catenin信号通路改善人脂肪源性血管外膜细胞(CD146+hAD-PCs)氧化损伤支持脐血造血干/祖细胞(UCB CD34+HSPCs)体外扩增的作用机制.方法建立H2O2诱导CD146+hAD-PCs氧化损伤模型,分为对照组、H2O2 组、ALRM+H2O2 组、CHIR-99021+H2O2 组、DKK1+AL-RM+H2O2 组.RT-qPCR及Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关因子的mRNA、蛋白相对表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光显微镜检测活性氧(ROS)水平.建立CD146+hAD-PCs和UCB CD34+HSPCs体外共培养体系,分为共培养对照组、H2O2 共培养组、ALRM+H2O2 共培养组、CHIR-99021+H2O2 共培养组,共培养1、2、4 周后,比较各组 UCB CD34+HSPCs 增殖情况和集落形成能力.结果 H2O2 诱导CD146+hAD-PCs氧化损伤,ALRM+H2O2 组β-catenin、Cyc lin D1 mRNA以及β-catenin蛋白相对表达水平较H2O2 组均升高(P均＜0.01);ALRM+H2O2 组和CHIR-99021+H2O2 组细胞凋亡率和ROS水平较H2O2 组均降低(P均＜0.01),而DKK1+ALRM+H2O2 组较ALRM+HH2O2 组升高(P均＜0.05).UCB CD34+HSPCs数量变化:在共培养 1、2、4 周时,H2O2 共培养组UCB CD34+HSPCs数量均低于共培养对照组、ALRM+H2O2 共培养组和CHIR-99021+H2O2 共培养组(P均＜0.01).UCB CD34+HSPCs集落形成能力:在共培养 1、2、4 周时,H2O2 共培养组集落形成单位数量均低于共培养对照组和ALRM+H2O2 共培养组,均高于CHIR-99021+H2O2 共培养组(P均＜0.01).结论 ALRM可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路,抑制H2O2 诱导的CD146+hAD-PCs凋亡和ROS积累,改善基质细胞(CD146+hAD-PCs)氧化损伤,进而支持与CD146+hAD-PCs共培养的UCB CD34+HSPCs体外扩增.