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3-MA及OPTN对稳转SOD1-G93A突变蛋白NCS-34细胞系中自噬通路蛋白的作用

The effects of 3-MA and OPTN on autophagy pathway proteins in NCS-34 cell line stably transformed with SOD1-G93A mutant protein

摘要目的 探索以自噬通路抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)及慢病毒(LV)为载体介导的视神经病变诱导反应蛋白(LV-OPTN)对稳转超氧化物歧化酶1(SOD1-G93A)突变蛋白的NCS-34细胞系自噬通路蛋白OPTN、p62、微管相关蛋白IA/IB轻链3(LC3)、TANK结合激酶1(TBK1)的变化.方法 采用稳转SOD1-G93A突变蛋白的NCS-34细胞系,并分为3组:无干预对照组、3-MA处理组(自噬通路抑制剂)、3-MA处理后给予LV-OPTN组,同时对3组细胞分别进行免疫荧光染色,特异性标记自噬通路蛋白p62、LC3、TBK1及OPTN,统计分析各蛋白的荧光含量.结果 与对照组相比,3-MA组细胞中自噬相关蛋白的荧光强度p62增多,而LC3、TBK1及OPTN均减少,与对照组相比差异有统计学意义(均P<0.05);对于3-MA预处理后再给予LV-OPTN组,我们观察到自噬通路相关蛋白的荧光表达有一定程度的恢复,即p62减少,而LC3、TBK1及OPTN均增加,与3-MA组相比差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 3-MA抑制稳转SOD1-G93A突变蛋白的NCS-34细胞系中自噬蛋白的活性,而LV-OPTN重新激活自噬,逆转了 3-MA诱导的自噬通路的抑制作用.

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