IDH1-R132H突变体通过调控miR-548ac/MYC轴抑制胶质瘤细胞干性
IDH1-R132H mutant inhibits the stemness of glioma cells by regulating the miR-548ac/MYC axis
摘要目的 探究IDH1-R132H突变体通过调控miR-548ac/MYC轴对胶质瘤细胞干性的影响.方法 TCGA和CGGA数据库分析MYC的表达与胶质瘤及异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)突变的关系.在U87-MG细胞中敲除MYC,检测干性标志物醛脱氢酶1(ALDH1)活性,CCK-8法检测细胞增殖.qPCR和Western blot分别检测Sox2、Nanog、Nestin干性标志蛋白的表达,肿瘤成球实验检测细胞自我更新能力.双荧光素酶报告基因验证miR-548ac和MYC的靶向关系.在U-87MG IDH1 R132H mutant细胞中分别转染pcDNA-MYC、miR-548ac inhibitor、miR-548ac inhibitor+si-MYC 检测 IDH1-R132H突变调控 miR-548ac/MYC轴对胶质瘤细胞干性的影响.结果 MYC在胶质瘤病人及细胞系中高表达,IDH1-R132H突变显著抑制MYC表达(P<0.001),敲除MYC使U-87MG细胞中ALDH1活性显著降低(P<0.01),Sox2、Nanog、Nestin表达水平显著下降(均P<0.001),肿瘤成球能力也显著减弱(P<0.01).在U-87MGIDH1 R132H mutant细胞中过表达MYC或者敲低miR-548ac时均可明显增强其干性维持能力,在U-87MG IDH1 R132H mutant细胞同时敲低miR-548ac和MYC不影响其干性维持能力.结论 在胶质瘤细胞中IDH1-R132H突变体通过miR-548ac/MYC轴抑制胶质瘤细胞干性.
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