换一批大豆叶绿体转化载体pJY系列的构建及其在烟草上的转化研究
Construction of Soybean Chloroplast Transformation Vector pJY Series and Its Transformation in Tobacco
摘要为解决杂交大豆(Glycine max)制种过程中不育系易与保持系混杂的问题,开展了大豆叶绿体转基因的研究.通过转基因方法在不育系的细胞质中植入筛选标记基因,以区分不育系和保持系.根据已发表的大豆叶绿体序列(GenBank X07675)设计引物,用PCR方法获得两段大豆叶绿体同源重组序列LHRR和RHRR,克隆到质粒pUC19中,并将来源于质粒pTF102的壮观霉素抗性基因aadA克隆到两段同源重组序列之间,以构建大豆叶绿体转化表达载体pJY01.aadA基因的启动子Prrn和终止子psbA基因3′序列,分别从烟草叶绿体基因组中扩增而来.在此基础上,将草丁膦抗性基因或绿色荧光蛋白与GUS的融合蛋白基因克隆到该载体上,得到pJY03与pJY04,并初步应用于烟草(Nicotiana tobacum)的叶绿体转化,获得了具壮观霉素抗性的绿色愈伤和幼苗,PCR扩增出aadA基因的条带,并在激光共聚焦扫描下检测到GFP的表达.
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