猪传染性胸膜肺炎放线杆菌缺失毒素1激活基因C(ApxIC)同时嵌合副猪嗜血杆菌外膜蛋白P2基因(ompP2)复合突变株的构建

Construction of An Activation of Toxin 1 Gene C (△apxIC) Mutant of Actinobacillus pleuropneumoniae Gomphosised Outer Membrane Protein P2 Gene(ompP2) of Haemophilus parasuis

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摘要猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)以及副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)是引起猪发病的2种病菌.本研究以APP血清5型分离株(SW1)为基础材料,通过构建重组转移载体pBOSK△IC-1和pBOSK△IC/ompP2,构成卡那霉素抗性基因(Kanr)和枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)的果聚蔗糖酶基因(sacB)的正负双向筛选表达盒,并筛选获得SW1株缺失毒素Ⅰ的激活基因C(Apx(I)C),同时嵌合Hps外膜蛋白P2基因(ompP2)的复合突变株SW1 △ApxIC/ompP2.该突变株经鉴定,与SW1亲本株相比,其缺失了大小为475 bp的apxIC基因,同时嵌合有大小为1 107bp的Hps ompP2基因,其基本生长特性与亲本株(SW1)没有显著区别;同时在体外,连续传代10代之后缺失的apxIC基因不会发生回复突变,嵌入的ompP2基因仍能够稳定遗传.本研究成功构建了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌缺失apxIC基因并嵌合有Hps ompP2基因复合突变株,为今后研究APP和Hps新型二联疫苗打下基础.