换一批牛白介素32基因可变剪接体(IL-32γ)的分子克隆及功能验证
Cloning and Characterization of Interleukin-32 Isoform (IL-32γ) from Bovine(Bos taurus)
摘要牛白细胞介素32(interleukin-32,IL-32)基因是近年发现的一种新型功能基因,是一种炎症性细胞因子,其主要作用是诱导其他细胞因子和化学因子的产生,并在自身免疫性炎症性疾病中发挥重要作用,可促进细胞凋亡,从而抑制结核分支杆菌(Mycobacterium)等多种分支杆菌感染,提高动物机体抗病能力.本研究从秦川牛(Bos taurus)脾脏组织中分子克隆了牛IL-32β基因及其可变剪接体IL-32γ基因,经序列分析表明,该基因定位于牛25号染色体上,实验克隆的牛IL-32β基因与NCBI中已发表序列有5个碱基不同,通过蛋白二级序列比较,该差异并不影响蛋白的折叠,推测这几个碱基差异是秦川黄牛IL32基因的SNP.IL-32γ比IL-32β序列多了第二内含子,导致编码序列多编码47个氨基酸.为了研究该可变剪接体的功能,本研究构建了真核表达载体pIRES-IL32γ-GFP.将该载体稳定转染小鼠(Mus musculus)巨噬细胞RAW264.7,获得超表达牛IL-32γ基因的小鼠巨噬细胞,同时以稳定转染人IL-32γ基因的小鼠巨噬细胞为阳性对照,Real-time PCR检测表明,超表达牛IL-32γ具有调节IL-1β、IL-6、MIP2、TNFα等细胞因子的功能,其趋势与阳性对照人IL-32γ的趋势相近.本实验研究为进一步研究牛IL-32γ基因生物学功能打下了基础.
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DOI
10.3969/j.issn.1674-7968.2013.01.005
发布时间
2013-03-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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