重组多杀性巴氏杆菌毒素的猪细胞毒性及其小鼠病理模型的建立

Porcine Cytotoxicity of Recombinant Pasteurella multocida Toxin and Establishment of Mouse (Mus musculus) Pathological Model

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摘要多杀性巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin,PMT)作为多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)最重要的毒力因子之一,危害生猪健康,造成巨大经济损失.为鉴定重组多杀性巴氏杆菌毒素(Recombinant Pasteurella multocida toxin,rPMT)对4种猪细胞的毒性并构建其小鼠(Mus musculus)毒性病理模型.本研究构建pColdⅠ-toxA载体并可溶性表达rPMT;通过形态学观察、细胞增殖毒性(cell counting kit-8,CCK-8)检测及钙黄绿素/碘化丙啶(calcein/propidium iodide)染色探究rPMT对PK15等4种猪细胞的毒性.运用寇氏(Karber)法测定rPMT对C57BL/6J小鼠的半数致死剂量(the median lethal dose,LD50),并对rPMT攻毒后小鼠的心、肝、脾、肺、肾、小肠进行组织病理学分析.结果显示,rPMT蛋白(146 kD)表达于上清;rPMT处理4种猪细胞后,PK15细胞形态变化最明显,细胞死亡较多,细胞活性显著降低(P<0.05),而IPEC细胞活性显著升高(P<0.05);rPMT对C57BL/6J小鼠的LD50为0.490 ng/g(rPMT/体重);攻毒后小鼠肠绒毛脱落,肾脏、肝脏充血严重,脾脏红髓区脾窦出血、淋巴细胞数量减少并伴有大量色素沉积.本研究鉴定发现rPMT对4种猪细胞中的PK15毒性作用最大并成功构建了rPMT对C57BL/6J小鼠的毒性病理模型,为深入研究PMT的致病机制提供了理论基础.