PPARγ激活和抑制状态下调控IFNβ表达的互作蛋白鉴定与分析

Identification and Analysis of Interacting Proteins Regulating IFNβ Expression in PPARγ Activated and Inhibited States

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摘要过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor γ,PPARγ)在肺泡巨噬细胞中特异性高表达,具有代谢和免疫调控作用.在先天免疫诱导产生Ⅰ型干扰素过程中,PPARγ究竟与哪些互作蛋白共同参与该过程的调控目前尚不清楚.本研究利用慢病毒载体系统构建了稳定过表达PPARγ-3×Flag的野猪(Sus scrofa)肺细胞系(wild boar lung cell line,WSL).以该细胞为模型,通过荧光定量PCR检测发现,添加PPARγ激动剂罗格列酮能显著降低双链DNA模拟物Poly(dA:dT)刺激诱发的干扰素β(interferon β,IFNβ)表达水平;相反,添加PPARγ抑制剂T0070907能显著提高Poly(dA:dT)刺激引起的IFNβ表达水平.进一步利用抗Flag蛋白的免疫磁珠富集沉淀调控上述过程的PPARγ-3×Flag蛋白复合物,将细胞质蛋白和细胞核蛋白富集的PPARγ-3×Flag复合物分别消化成肽段,利用液相色谱-串联质谱联用(liquid chromatograph-tandem mass spectrometer,LC-MS/MS)进行检测分析.结果发现,在添加PPARγ激动剂的条件下,与PPARγ特异互作的胞质蛋白有101个,胞核蛋白有95个;在添加PPARγ抑制剂的条件下,与PPARγ特异互作的胞质蛋白有24个,胞核蛋白有14个.GO和KEGG分析表明,与PPARγ特异互作的胞质蛋白和核蛋白均与翻译调控相关.本研究为深入探究PPARγ调控IFNβ表达机制提供了新线索.