摘要目的 建立基因修饰供体猪肾脏获取、灌注、保存和运输的方法.方法 以 8基因修饰猪为实验动物,肾脏获取前通过血液学检查猪的健康状况,影像学检查肾脏血管结构.肾脏获取后对猪肾脏进行灌注,将猪肾打包后放入粘贴"器官运输专用"标识的低温保存箱中,与运输部门沟通运输流程后跨省运输.采用苏木素-伊红(HE)染色、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)荧光染色和酶联免疫吸附试验(ELISA)评估猪肾病理损伤情况.结果 术前检查8基因修饰猪的血清肌酐 73.2 μmol/L、血尿素氮 2.8 mmol/L、血红蛋白 116 g/L,均在正常范围内,提示肾功能正常;CT造影显示猪肾脏无病变,血管无扩张、狭窄或过早分支的情况;从 8基因修饰猪获取左、右肾时间共计(125±10)min,出血量为(20±2)mL,热缺血时间分别为 3 min和 7 min;左、右肾灌注修整时间分别为 36 min和41 min,灌注后双肾色白质润;冷保存运输时间为 8 h,HE染色结果显示肾脏保存至 8h时部分肾小球发生皱缩,周围肾小管管腔向内轻微凹陷肿胀并有部分内膜脱落,有微小空泡形成;肾脏组织中半胱氨酸天冬氨酸酶3信使RNA水平在冷保存 2h后随时间延长逐渐升高(P<0.05);TUNEL荧光染色显示冷保存至 8h仅有少量细胞凋亡,这与 0h相比无差异(P>0.05).ELISA结果显示保存液乳酸脱氢酶(LDH)和肌酐含量保持相对稳定,但肾损伤分子 1(KIM-1)含量随保存时间延长逐渐升高,提示猪肾脏有轻微损伤.结论 通过建立基因修饰供体猪的肾脏获取、灌注、保存和运输方法,可有效可靠地将基因修饰猪肾脏用于异种肾脏移植.