摘要目的 探讨分泌型磷蛋白1(SPP1)+巨噬细胞在慢性移植肾纤维化形成中的作用及可能机制.方法 基于慢性移植肾失功(CAD)患者肾组织的单细胞转录组数据分析SPP1+巨噬细胞在CAD患者移植肾中的表达特征.对单细胞转录组数据结果进行转录因子VIPER分析以及DoRothEA转录因子活性分析.收集肾移植受者肾脏组织样本,包括CAD组(n=5)和未发生移植肾纤维化组(CTL组,n=5).建立同种异体小鼠移植肾慢性排斥反应模型,分为同种异体肾移植组(CAD组,n=3)和同品系肾移植组(SYN组,n=3).苏木素-伊红染色检测小鼠肾组织损伤情况,Masson染色检测小鼠肾组织纤维化.免疫荧光染色检测肾移植受者及小鼠移植肾组织中SPP1表达.提取小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)进行缺氧刺激,采用蛋白质印迹法检测缺氧诱导因子(HIF)-1α和SPP1表达,流式细胞术检测SPP1表达.将HIF-1α过表达质粒和HIF-1α小干扰RNA(siRNA)转染至BMDM后进行缺氧干预,蛋白质印迹法检测HIF-1α和SPP1表达.将小鼠主动脉内皮细胞(MAEC)与BMDM上清液进行共培养,蛋白质印迹法和免疫荧光检测共培养后内皮-间充质转化(EndMT)相关指标表达.结果 单细胞转录组数据分析结果显示,CAD组移植肾组织SPP1+巨噬细胞比例高于CTL组(P＜0.05).CAD组小鼠肾损伤评分高于SYN组,间质纤维区域占比大于SYN组(均为P＜0.05).免疫荧光染色结果显示,与CTL组相比,CAD组SPP1+巨噬细胞比例升高;与SYN组相比,CAD组SPP1+巨噬细胞比例升高(均为P＜0.05).转录因子VIPER分析以及DoRothEA转录因子活性分析结果显示,SPP1+巨噬细胞中缺氧通路激活,HIF-1α等转录因子表达升高.在缺氧条件下,BMDM中SPP1表达水平升高.敲低HIF-1α可抑制缺氧诱导的SPP1蛋白表达;而过表达HIF-1α可上调SPP1蛋白表达水平.缺氧诱导的BMDM与MAEC共培养后,EndMT相关指标表达水平升高.结论 缺氧诱导分化的SPP1+巨噬细胞在慢性移植肾纤维化形成中显著浸润,可能通过诱导肾血管内皮细胞发生EndMT过程促进移植肾纤维化形成.