换一批
换一批多房棘球绦虫多表位疫苗GILE的设计构建及原核表达
Construction and prokaryotic expression of multiepitope vaccine GILE of Echinococcus multilocularis
摘要目的 设计、构建多房棘球绦虫多表位疫苗GILE,并表达、纯化该重组蛋白.方法 基于课题组前期对多房棘球绦虫EmEMY162、EmLAP、EmGLUT1优势抗原表位鉴定的结果,通过SWISS-MODEL、pyMOL、SOPMA、VMD生物信息学软件预测GILE的结构及疏水性,设计多表位疫苗GILE.合成GILE序列,插入质粒pCzn1中,构建重组质粒pCzn1-GILE.将重组质粒转化入大肠杆菌Artic express中,添加IPTG诱导重组蛋白表达.通过SDS-PAGE和免疫印迹法确定重组蛋白是否表达.结果 通过SWISS-MODEL软件开展同源建模,结果表明抗原表位最优串联方式为EMY16295-104—LAP464-479—LAP495-510—LAP396-410—EMY162106-121—LAP504-518—EMY162112-126.通过SOPMA软件分析GILE的二级结构,结果表明α螺旋占13.84％,β折叠占26.25％,β转角占14.88％,无规卷曲占45.82％.通过酶切和测序验证表明,质粒pCzn1-GILE构建成功.通过IPTG诱导,得到45KD的重组蛋白.通过Ni-NTA柱的亲和纯化,得到纯化重组蛋白GILE.通过West-ern blotting法验证,纯化后的GILE蛋白能与His抗体特异结合,得到纯化重组蛋白GILE.结论 本研究通过生物信息学软件成功设计、构建了多表位疫苗GILE,并通过GILE原核表达系统表达、纯化了重组蛋白GILE.
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