换一批幽门螺旋杆菌尿素酶纳米抗体UreNb重组质粒的构建及其产物的表达、纯化与鉴定
Construction of recombinant plasmid of Urease Nanobody UreNb against Helicobacter pylori and expression,purification and identification of its product
摘要目的 构建幽门螺旋杆菌尿素酶纳米抗体UreNb重组质粒,在大肠杆菌系统中通过诱导表达目的蛋白并予以纯化,再对表达产物及纯化产物进行鉴定.方法 利用DNA重组技术,先后使用两种原核表达载体pET22b和pSumo-mut表达目的蛋白UreNb,构建幽门螺旋杆菌尿素酶纳米抗体UreNb,重组质粒.将构建成功的纳米抗体UreNb重组质粒分别转化至大肠杆菌BL-21、Arctic Express、Rosetta菌株中,采用不同温度经IPTG诱导表达目的蛋白.将成功表达的重组蛋白扩大培养,通过SDS-PAGE法分析其表达蛋白,表达蛋白在沉淀物中即确定为包涵体蛋白.将包涵体蛋白变、复性后,通过镍柱亲和层析法纯化蛋白并用 Western Blot法鉴定.结果 纳米抗体UreNb目的序列成功插入质粒中,在大肠杆菌表达系统BL-21 中以包涵体形式表达(经SDS-PAGE法验证).经过包涵体复性后纯化,获得大量高纯度目的蛋白pSumo-mut-UreNb,纯化蛋白的分子量约为 27 kDa(经Western Blot鉴定).结论 使用pSumo-mut质粒构建的幽门螺旋杆菌尿素酶纳米抗体UreNb能够在原核系统中得到高效表达,通过纯化获得具有活性的纯化蛋白.经鉴定,其大小与理论大小基本相符,可用于后续研究.
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分类号
R392.11（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.13452/j.cnki.jqmc.2023.03.008
发布时间
2023-11-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
宁夏回族自治区重点研发计划项目（2020BFG02012）
青海省科技厅自然科学基金青年项目（2020-ZJ-963Q）
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