换一批抗多房棘球蚴亮氨酸氨基肽酶纳米抗体筛选及原核表达纯化
Screening and prokaryotic expression purification of nano antibody against Leucine aminopeptidase of Echinococcus multilocularis
摘要目的 筛选抗多房棘球蚴亮氨酸氨基肽酶(Em-LAP)纳米抗体并构建该纳米抗体原核表达系统,表达纯化纳米抗体蛋白,获得高特异性抗多房棘球蚴亮氨酸氨基肽酶的纳米抗体.方法 利用噬菌体文库展示技术(phage library display technology)筛选亮氨酸氨基肽酶纳米抗体,应用phage-ELISA法检测纳米抗体与靶蛋白的亲和力.将亲和力高的抗体测序后,串联目的序列并优化密码子,合成后接入表达载体pET30a做酶切鉴定.将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,表达的蛋白经金属螯合亲和层析纯化获得目的蛋白LAPNb.结果 筛选出抗Em-LAP纳米抗体,构建了重组pET30a-LAPNb质粒,得到了一个大小约为28KD的LAPNb蛋白.结论 本研究成功筛选获得了抗Em-LAP纳米抗体,构建了 LAPNb原核表达系统,表达纯化了 LAPNb蛋白.
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关键词
多房棘球蚴纳米抗体亮氨酸氨基肽酶噬菌体文库展示技术Echinococcosis multilocularisnanoantibodyLAPphage library display technology
分类号
R392.11（医学免疫学）
栏目名称
DOI
10.13452/j.cnki.jqmc.2024.03.003
发布时间
2024-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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