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藏药砂生槐子总生物碱对血管内皮细胞新生血管生成的作用及对VEGF-A、VEGF-R2表达的影响

Effects of total alkaloids from Xizang medicine Sophora moocrorftia-na on the angiogenesis of vascular endothelial cells and the expression of VEGF-A and VEGF-R2

摘要目的 探讨藏药砂生槐子总生物碱(Total alkaloids of Sophora moocrorftiana,TA-SM)对血管内皮细胞新生血管生成的作用及对VEGF-A、VEGF-R2表达的影响.方法 采用CCK8法、Woundhealing法和Flow Cytometry法评价TA-SM与EA.hy926细胞共培养24 h对细胞增殖、迁移、凋亡和周期的影响.采用Western Blot法和RT-qPCR法测定TA-SM处理EA.hy926细胞24 h时对VEGF-A、VEGF-R2蛋白及mRNA相对表达水平的影响.以Sorafenib为阳性对照,以小管的分支数量、总长度、节点数量、主要片段总长度等指标评价TA-SM与HUVEC共培养6 h对小管形成的影响.以血管面积和血管面积百分比等指标评价TA-SM与鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型共培养24 h对新生血管生成的影响.结果 1.CCK8结果显示,TA-SM对EA.hy926细胞和HUVEC细胞的增殖效果随着浓度的增加而增强,IC50分别为18.52 μg/mL和9.15 μg/mL.TA-SM对EA.hy926细胞迁移和凋亡的影响具有时间和浓度依赖性(P<0.05).实验组较空白对照组EA.hy926细胞的G1期比例显著增高,S期细胞比例显著降低,且具有浓度依赖性(P<0.05).在小管形成实验中,实验组小管的分支数量、分支总长度、分支节点数量、主要片段总长度均明显下降,其中阳性对照组Sorafenib的浓度高于TA-SM 12.5倍的情况下,抑制小管形成作用更优(P<0.05).在CAM血管生成实验中,CAM的血管面积和血管面积百分比均有所下降,其中阳性对照组Sorafenib的浓度高于TA-SM 8.3倍的情况下,抑制CAM血管生成作用更优(P<0.05).2.用TA-SM处理EA.hy926细胞可抑制 VEGF-A、VEGF-R2 蛋白(P<0.05)和 mRNA(P<0.05)的表达.结论 1.TA-SM 抑制 EA.hy926细胞增殖、迁移,阻滞细胞G1期,诱导凋亡,抑制HUVEC细胞小管的形成、CAM新生血管的生成.2.推测TA-SM可能通过VEGF-A、VEGF-R2信号轴抑制新生血管生成.

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