换一批
换一批肝癌靶向性T细胞活化融合基因scFv-CD3ζ的构建与表达
Construction and expression of an eukaryotic expression vector to humanized disulfide-stabilized anti-HCC scFv-CD3ζ
摘要目的:构建抗肝癌单链抗体融合CD3ζ真核表达载体.方法 :应用PCR法将二硫键稳定的人源化的单链抗体scFv的基因克隆入真核细胞表达载体pcDNA3,在5′端及3′端分别引入相应酶切位点;用RT-PCR法从正常外周血人T细胞扩增出CD3ζ的胞内区、跨膜区基因,然后将其克隆于scFv的下游,并在5′端及3′端引入相应的酶切位点.以脂质体转染法将pcDNA3-scFv-CD3ζ转入T细胞,采用免疫细胞化学的方法,利用抗CD3ζ的单克隆抗体检测转染前后T细胞中CD3ζ的表达.结果: 二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体scFv的cDNA片段为735 bp,与已知的序列相符;CD3ζ的胞内区、跨膜区的cDNA片段为294 bp,与GeneBank公布的序列一致.重组的表达载体经酶切琼脂糖电泳及测序加以证实.转染前后T细胞中CD3ζ染色强度显著增强.结论:完成了二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体scFv及CD3ζ的胞内区、跨膜区融合基因真核表达载体pcDNA3-scFv-CD3ζ的构建,制备了肝癌靶向性T细胞.
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