RNAi抑制Survivin基因表达对乳腺癌SKBr-3细胞放射敏感性影响的研究

Effect of inhibiting Survivin expression by RNA interference on radiosensitivity of SKBr-3 breast cancer cells

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摘要目的:研究利用RNA干扰抑制Survivin基因的表达对人乳腺癌SKBr-3细胞放射敏感性的影响.方法:构建针对Sur-vivin基因的RNA干扰真核表达载体pSU-PER-S1并转染SKBr-3细胞,分别用RT-PCR和蛋白质印迹法检测Survivin mR-NA和蛋白表达水平的变化;流式细胞仪检测细胞周期;平板克隆形成实验计算细胞存活率,用单击多靶数学模型进行曲线拟合做图,求曲线参数D0、Da和N值,比较细胞放射敏感性变化.结果:RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果表明,pSUPER-S1转染后的SKBr-3细胞中Survivin mRNA和蛋白水平显著下降;流式细胞仪检测结果显示,转染后的SKBr-3细胞G1期阻滞明显[(74.03±8.91)%].高于对照组[(44.21±12.03)%],S期细胞数减少[(17.11±4.96)%],低于对照组((43.12±8.64)%],P<0.05;经不同剂量γ射线照射后的细胞存活曲线拟合作图后发现,转染后的细胞D0、N和Dq值均下降(D0=1.29,N=4.9,Dq=2.6),与对照组相比(D0=1.56,N=14.85,Dq=5.21)差异有统计学意义(P<0.05).提示细胞放射增敏感性增加.结论:利用RNA干扰技术抑制Survivin基因在乳腺癌sKBr-3细胞中的表达可以增加其对放疗的敏感性.