换一批
换一批siRNA沉默人组织因子基因对大肠癌侵袭转移能力影响的观察
Effect of siRNA silenced human tissue factor gene on colorectal carcinoma cell invasion and metastasis
摘要目的:应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)的手段抑制人类结肠癌细胞内组织因子(tissue factor,TF)基因表达,从而探讨对其侵袭转移能力的影响.方法:首先构建携带有针对TF基因有效的siRNA序列的真核细胞表达质粒pSU-PER-TF,用此质粒转染人类结肠转移癌细胞系LoVo,应用RT-PCR和蛋白质印迹法从RNA及蛋白质水平检测证实细胞内源性TF基因被敲减后的表达水平变化,通过Matrigel体外侵袭实验进一步考证对细胞侵袭转移能力所造成的影响.结果:RT-PCR及蛋白质印迹法结果显示,与转染pSUPER质粒的LoVo细胞相比,转染重组干扰质粒pSUPER-TF-1的细胞其内源性TF基因的表达水平被显著敲减.Matrigel体外侵袭实验证实,转染pSUPER质粒的LoVo穿膜细胞均数为(220±7.0)个,而转染pSUPER-TF-1质粒的LoVo穿膜细胞均数为(102±4.0)个,两组差异有统计学意义,t=25.293,P=0.008.结果表明,转染pSU-PER-TF-1质粒的LoVo细胞侵袭转移能力显著下降.结论:以TF基因作为靶点应用RNA干扰技术敲减其表达可以明显降低LoVo细胞体外侵袭转移能力,为结肠癌的临床治疗提出新的思路,可以作为结肠癌治疗的一个新靶点.
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