换一批
换一批p53激活抗肿瘤药物应用p21途径双荧光素酶报告系统筛选初步研究
Establishment and application of the dual-luciferase reporter system for screening anti-tumor medicine of reactivating p53 based on the p21 pathway
摘要目的:构建含人p21启动子的双荧光素酶报告载体,感染肿瘤细胞后用于检测p53激活的抗肿瘤药物筛选.方法:从人血白细胞DNA中克隆p21启动子,用于控制Firefly荧光素酶的表达;Renilla荧光素酶基因和EGFP基因与IRES相连,在CMV启动子控制下表达;将上述元件和基因克隆至载体pLL3.7中,应用酶切和测序反应验证后再转染至U251和Eca109肿瘤细胞建立细胞检测模型.结果:成功构建含人p21启动子、大小约13 kb的pLL3.7-Dluc重组质粒,经LipofecttamineTM转染后用于细胞药物筛选;采用MTT方法对8种不同药物对U251和Eca109细胞处理后进行IC50检测,其中姜黄素和丹参酮ⅡA在U251肿瘤细胞中的IC50分别为20和8μg/mL,Eca109细胞的IC50分别为12和25 μg/mL;药物作用转染后U251细胞48 h后作荧光素酶检测,计算F/R值并SPSS 13.0分析,姜黄素和丹参酮ⅡA的P值分别为0.003和0.024,药物作用后荧光检测结果显著;该实验在Eca109细胞模型中姜黄素和丹参酮ⅡA取得了一致性的结果,P值分别为0.001和0.015.人参皂苷Rb1与阴性对照组相比差异有统计学意义,P=0.022.结论:通过p21途径检测双荧光素酶基因的表达状况,提示姜黄素、丹参酮ⅡA和人参皂苷Rb1三种药物在U251和Eca109肿瘤细胞中具有使p53活性增加的功能.
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关键词
p21启动子p53激活药物筛选双荧光素酶报告系统抗肿瘤活性姜黄素丹参酮人参皂苷p21 promoterreactivate p53drugs screeningdual-Luciferase gene reporter systemantitumor activitycurcumintanshinoneginsenoside
分类号
R73-3
栏目名称
实验研究/论著
DOI
10.3969/j.issn.1673-5269.2013.20.007
发布时间
2014-01-08
基金项目
教育部博士点基金
广东省科技计划项目
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