摘要目的 肿瘤干细胞一直都是肿瘤研究领域的热点,但其分离鉴定方法尚未成熟,关于肿瘤干细胞生物特性与自噬表达相关性研究较少.因此,本研究通过无血清悬浮培养法富集肺腺癌干样细胞,鉴定其生物特性并初步检测其自噬表达水平.方法 将人肺腺癌A549亲本细胞(A549 monolayer,A549-MN)作为对照组,A549干样细胞(A549 stem-like cells,A549-SC)作为实验组.其中,A549-SC通过将A549-MN置于含有诱导因子重组人表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、重组人碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和B27的无血清悬浮培养基中富集得到.采用流式细胞术检测A549-MN及A549-SC的“CD44+”和“CD 133+”标记细胞比例,分化实验检测其分化能力;Transwell迁移和侵袭实验检测其迁移侵袭能力,实时荧光定量PCR及蛋白质印迹实验检测肿瘤干细胞干性基因OCT4、Nanog、Bmi 1和自噬相关因子Beclin1、LC3B的mRNA及蛋白表达水平,透射电子显微镜观察分析A549-MN及A549-SC自噬小体形成情况.结果 无血清悬浮培养法可从A549-MN中富集干样细胞且能稳定传代;A549-SC中“CD44+”及“CD133+”标记细胞比例(14.2％,7 111/50 231)高于A549-MN (1.2％,680/54 858).分化实验表明,A549-SC在含血清的培养基中又可分化成形态学上与A549-MN无差异的贴壁细胞.Transwell实验示,A549-MN与A549-SC的迁移细胞数分别为(96±3)及(121±2)个/视野,t=9.78,P＜0.01;侵袭细胞数分别为(22±1)及(52±3)个/视野,t=11.72,P＜0.01,差异均有统计学意义.与A549-MN相比,A549-SC的干性基因OCT 4 (t=2.41,P＜0.05)、Nanog (t=13.84,P＜0.01)、Bmi 1 (t=14.56,P＜0.01)及自噬因子Beclin 1(t=7.44,P＜0.01)、LC3B (t=10.59,P＜0.01)的mRNA表达水平均升高,干性基因Nanog(t=11.55,P＜0.01)、Bmi 1 (t=4.37,P＜0.01)及自噬因子Be-clin1(t=9.69,P＜0.01)、LC3B(t=15.7,P＜0.01)的蛋白表达水平也升高.同时,电镜观察显示A549-SC的自噬小体较A549-MN增多.结论 应用无血清悬浮培养法可富集得到人肺腺癌A549干样细胞,其具有干细胞生物特性且存在高水平自噬表达现象.