摘要目的 分析肿瘤引流淋巴结(TDLNs)中记忆T细胞亚群的变化及相关基因调控网络,探讨大分割放疗在乳腺癌远隔效应发生中的影响及其机制.方法 采用C57BL/6J小鼠建立双侧EO771单克隆原位乳腺癌模型,将小鼠随机分为对照组(n=6)和辐照组(n=6).辐照组接受单侧肿瘤大分割放疗方案(9 Gy×3次),对照组不进行处理.观察2组小鼠双侧肿瘤的体积变化,并于辐照后第9天收集双侧肿瘤及TDLNs.上述实验重复3次.通过流式细胞术检测肿瘤微环境中免疫细胞亚群的比例,并对TDLNs进行转录组测序以分析差异表达基因.采用肿瘤免疫系统交互数据库(TISIDB)进行临床相关性分析,并采用Spearman相关分析法评估差异基因与免疫细胞浸润水平之间的关系.结果 大分割放疗显著抑制了双侧肿瘤生长,辐照组照射侧肿瘤体积[(4.802±0.624)mm3]相比于对照组的(164.313±16.451)mm3 缩小(t=9.689,P＜0.001),远隔侧肿瘤体积[(17.990±7.048)mm3]较对照组的(94.469±15.678)mm3亦减小,t=4.450,P=0.001.流式细胞术结果显示:(1)辐照组照射侧肿瘤中CD8+T细胞比例为(0.53±0.56)％,低于对照组的(0.92±0.14)％,t=2.727,P=0.023;远隔侧肿瘤中2组免疫细胞的比例差异均无统计学意义,P＞0.05.(2)辐照组照射侧TDLNs中CD4+T细胞比例为(64.87±1.63)％,高于对照组的(44.51±2.35)％,t=7.121,P＜0.001;辐照组照射侧TDLNs中组织驻留记忆CD8+T(TRM)细胞比例为(7.33±1.33)％,高于对照组的(3.03±0.46)％,t=3.050,P=0.016;效应记忆 CD8+T(TEM)细胞比例为(40.27±1.70)％,也高于对照组的(33.18±1.05)％,t=3.559,P=0.007.(3)远隔侧 TDLNs 中 CD8+T 细胞比例为(10.21±1.55)％,低于对照组的(16.86±1.94)％,t=2.600,P=0.029;辐照组中记忆CD8+T细胞比例相较于对照组也明显升高[TRM:(6.24±0.77)％vs(3.06±0.46)％;TEM:(38.93±1.17)％vs(29.14±2.51)％],t 值分别为 3.695 和 3.297,P 值分别为 0.005 和0.009.转录组测序鉴定出39个共同差异表达基因.通过TISIDB数据库分析发现,在患者乳腺癌组织中,肝型脂肪酶C(LIPC)、磷酸二酯酶6G(PDE6G)和髓鞘蛋白零(MPZ)基因的表达与TEM细胞丰度呈正相关(rs值分别为0.643、0.488和0.340,P＜0.001),WNT1诱导信号通路蛋白2(WISP2)、LIPC和PDE6G基因的表达与中央效应T细胞的丰度呈正相关(rs值分别为0.387、0.336和0.311,P＜0.001).结论 大分割放疗通过上调TDLNs中记忆T细胞比例及相关基因表达诱导远隔效应,LIPC、PDE6G等基因可能成为放疗联合免疫治疗的潜在靶点.