换一批联合抑制BRD4和Notch1对胶质瘤起始细胞侵袭迁移能力的影响研究
Study on effect of combined BRD4 and Notch1 inhibition on the invasive and migratory capacity of glioma-initiating cells
摘要目的 观察应用JQ1 和DAPT联合抑制BRD4 和Notch1 通路对人胶质瘤起始细胞侵袭迁移能力的影响.方法 将U87 细胞置于无血清DMEM/F12 干细胞培养基中培养,使用免疫磁珠法分选获得GICs,免疫荧光检测CD133 及nestin鉴定GICs;JQ1 为BRD4 特异性抑制剂,DAPT为Notch1 通路特异性抑制剂,设不同干预组:对照组、JQ1 处理组、DAPT处理组、JQ1 和DAPT共同处理组.运用RT-PCR及Western blot的手段检测各通路组的抑制情况;运用Transwell侵袭和迁移实验观察各组细胞侵袭能力的强弱.结果 免疫荧光结果显示,在细胞球中 nestin和 CD133 呈阳性表达,可鉴定为 GICs.与对照组和DAPT处理组相比,JQ1 处理组及 JQ1 和 DAPT 共同处理组 BRD4 的 mRNA 及蛋白表达明显降低(P<0.01);与对照组相比,JQ1 处理组、DAPT处理组及JQ1 和DAPT共同处理组HES1 的mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05),其中与JQ1 处理组、DAPT处理组相比,JQ1 和DAPT共同处理组HES1 的mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.01);Transwell显示:和对照组相比,JQ1 处理组、DAPT处理组及JQ1 和DAPT共同处理组的侵袭迁移能力降低,通过小室聚碳酸酯膜的细胞数目明显减少,其中JQ1 和DAPT共同处理组通过小室聚碳酸酯膜的细胞数目显著少于JQ1 处理组、DAPT处理组,差异均具有统计学意义(P<0.01).结论 通过联合抑制BRD4 和Notch1,能够显著降低胶质瘤起始细胞侵袭迁移能力.
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