换一批
换一批O139群霍乱弧菌TLC、CTX、RTX基因簇缺失株的构建及鉴定
Construction and Identification of TLC,CTX,and RTX Gene Cluster Deletion Mutant of O139 Serogroup Vibrio cholerae
摘要目的 构建O139群霍乱弧菌TLC、CTX、RTX基冈簇缺失株.方法 PCR扩增TLC上游片段(TLC up)、RTX下游片段(RTX down),克隆入pu18中,再在两者间插入氯霉素抗性(Cm)基因,获得重组质粒pUC18-TLC up-Cm-RTX down.酶切回收TLC up-Cm-RTX down片段,克隆入自杀质粒pDS132,构建重组自杀质粒pDS132-TLC up-Cm-RTX down.通过接合将重组自杀质粒转入O139群霍乱弧菌ZJ199693,20%蔗糖选择培养基(Cm抗性)筛选TLC、CTX、RTX基凶缺失株.结果 PCR、酶切证明重组自杀质粒pDS132-TLC up-Cm-RTXdown构建正确.PCR证实0139群霍乱弧菌ZJ199693 TLC、CTX、RTX毒力基因簇成功缺失.结论 成功缺失O139群霍乱弧菌ZJ199693TLC、CTX、RTX基因簇,为进一步研究其功能和疫苗构建打下基础.
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