换一批OGG1基因表达的半定量RT-PCR检测方法的建立
Establishment of a semi-quantitative RT-PCR system for the detection of OGG1 expression
摘要目的 培养的犬肾细胞(MDCK)内8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)基因表达的半定量RT-PCR检测体系的建立.方法 培养MDCK细胞后提取总RNA,经优化进行RT-PCR反应,检测细胞内OGG1基因的表达.扩增产物经测序同GenBank中OGG1基因序列比对验证产物的准确性,条带经Image J软件分析并与内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)相比,对体系的重复性进行分析.结果 扩增产物证实与GenBank中该细胞的OGG1基因序列一致;重复性测定发现,MDCK细胞OGG1与GAPDH灰度值比值的均值为(0.84±0.025),CV值为2.99％.结论 本方法的准确性、重复性均较好,可用于半定量检测培养细胞尤其是MDCK细胞内OGG1 mRNA的表达量.
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