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遗传减毒伯氏疟原虫ANKA株的构建及其免疫保护效应

Establishment of a genetically attenuated strain of Plasmodium berghei ANKA and its immune protective effect

摘要目的：构建遗传减毒伯氏疟原虫ANKA株（Plasmodium berghei ANKA，P．b ANKA），并用此减毒疟原虫株免疫C57BL／6J小鼠观察免疫保护效果。方法分别扩增UIS3基因编码序列两端的非编码区5′UTR和3′UTR及用于筛选的抗性标记hDHFR，然后利用融合PCR原理，扩增全长同源重组片段（5′UTR＋hDHFR＋3′UTR），最后常规PCR扩增获得大量线性化同源重组片段并纯化。体外培养富集伯氏疟原虫ANKA株的成熟裂殖体，将线性化同源重组片段通过电转的方式导入裂殖体中并接种到小鼠体内，再对转化后的疟原虫进行筛选和鉴定，最后用构建成功的减毒伯氏疟原虫ANKA株免疫小鼠并攻击，观察减毒株的免疫保护效力。结果成功扩增3个独立片段5′UTR、hDHFR和3′UTR ，长度分别为798、1628和759 bp ，后经融合 PCR 反应形成全长重组片段5′UTR＋hDHFR＋3′UTR ，长度为3185 bp。转化至裂殖体后经筛选鉴定获得遗传减毒伯氏疟原虫ANKA株，将此遗传减毒株免疫小鼠后攻击，小鼠红内期原虫率为0％，脑型疟发生率为0％，存活率为100％，可使其完全抵御野生型疟原虫感染。结论成功构建遗传减毒伯氏疟原虫ANKA株，此减毒株对小鼠的免疫保护率为100％，此模型的建立可为研究红前期疫苗免疫保护机制奠定基础。