换一批枯草芽孢杆菌表达人ADH1B和ALDH2及其活性与稳定性研究
The enzyme activity and stability of recombinant human ADH1B and ALDH2 expressed in Bacillus subtilis
摘要目的 构建可表达具有活性的人源乙醇脱氢酶(ADH1B)和乙醛脱氢酶(ALDH2)的重组枯草芽孢杆菌(B.subtilis)并验证其稳定性.方法 将ADH1B和ALDH2的编码基因adh1B和aldh2分别克隆至表达载体pBE2R中,构建重组质粒pBE2R-adh1B和pBE2R-aldh2,使用化学转化法将重组质粒分别转化B.subtilis WB600;在37℃,200 r/min条件下进行表达;Western blotting鉴定表达结果,检测目的蛋白酶活性,体外模拟人工胃液环境评价重组工程菌对酸性环境的耐受程度.结果 构建的重组工程菌在37℃,200 r/min条件下培养24 h后,培养基上清及细菌沉淀中均可表达ADH1B和ALDH2;上清中的ADH1B和ALDH2酶活性分别为3.67 U/mL、1.61 U/mL;重组工程菌在pH为2、3、4的人工胃液中消化0～2 h后活菌量与处理前相当.结论 B.subtilis WB600可表达可溶性且具有酶活性的人ADH1B和ALDH2,重组工程菌可良好耐受强酸环境.
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