换一批乳酸乳球菌介导的结核分枝杆菌ESAT-6重组抗原的构建、表达及鉴定
Construction,expression and identification of recombinant Mycobacterium tuberculosis ESAT-6 antigen mediated by Lactococcus lactis
摘要目的 构建乳酸乳球菌(LL)为载体的结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶6(ESAT-6)疫苗,并研究其表达效率,为结核病的防治提供参考.方法 以pGEX-ESAT-6为模板扩增ESAT-6基因,采用Xba Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后插入pMG36e,构建重组质粒pMG36e-ESAT-6,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,抽提质粒进行双酶切鉴定;电穿孔转化乳酸乳球菌MG1363株,构建结核分枝杆菌重组LL-ESAT-6(rLL-ESAT-6)疫苗,抽提质粒进行PCR鉴定.结果 用Xba Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切重组质粒pMG36e-ESAT-6,呈现3 600 bp的载体条带和288 bp的目标条带;PCR显示,rLL-ESAT-6疫苗可以扩增出288 bp的ESAT-6基因;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,rLL-ESAT-6可表达6×103Mr的ESAT-6蛋白,表达蛋白约占菌体总蛋白的20％;免疫印迹表明表达蛋白可被结核病患者的血清所识别.结论 成功构建了结核分枝杆菌rLL-ESAT-6疫苗,表达的ESAT-6蛋白具有特异的抗原性.
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