共聚焦激光扫描显微镜对约氏疟原虫卵囊、子孢子胞内Ca2+的检测方法研究
DETERMINATION OF OOCYSTES AND SPOROZOITES OF PLASMODIUM YOELII INTRACELLULAR FREE CALCIUM BY CONFOCAL LASER SCANNING MICROSCOPY
摘要本文报告建立用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察约氏疟原虫卵囊、子孢子胞内游离Ca2+的分布和实验检测方法。以荧光染料Fluo-3作胞内Ca2+指示剂,结果显示3μ、4μmol/L Fluo-3/Am同时加入1μl/ml 25%Pluronic F-127在37℃恒温下,分别孵育分离的约氏疟原虫子孢子、卵囊60min即可达到最佳的负载效果。Fluo-3/Am浓度的提高和孵育时间延长只能增加背景染色,若降低孵育浓度和缩短孵育时间则难于达到最佳的负载效果。子孢子胞内游离Ca2+分布均匀;而卵囊内游离Ca2+分布不均匀,成块状分布,囊壁无荧光。研究表明应用Fluo-3/AM和Pluronic F-127结合CLSM技术是研究疟原虫卵囊、子孢子胞浆内游离Ca2+的准确、灵敏的方法之一。
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