换一批聚乙烯降解菌白浅灰链霉菌LBX-2烷烃羟化酶基因SaalkB的克隆与表达分析
Cloning and Expression Analysis of Alkane Hydroxylase Gene SaalkB of the Polyethylene Degrading Strain Streptomyces albogriseolus LBX-2
摘要白浅灰链霉菌(Streptomyces albogriseolus)LBX-2 能够高效降解聚乙烯(polyethylene,PE),而烷烃羟化酶alkB基因在聚乙烯降解中可能发挥重要作用.以LBX-2 基因组为模板,利用PCR技术扩增SaalkB基因,该基因全长1086 bp,编码361 个氨基酸.对该基因编码蛋白进行生物信息学分析,发现AlkB蛋白包含5 个跨膜结构域,无信号肽,属于亲水性蛋白,二级结构主要由无规则卷曲和α螺旋组成,与链霉菌Stre-tomyces sp.XY006 的AlkB蛋白的同源性达100%.将克隆得到的SaalkB基因连接到表达载体pDE1 上进行原核表达,且重组工程菌株能够降解PE.SDS-PAGE结果显示得到与预期蛋白分子量(40.9 kDa)大小一致的蛋白.利用荧光定量PCR发现,白浅灰链霉菌LBX-2 在以PE为唯一碳源的培养基中SaalkB基因的表达量约为在高氏一号培养基中的30 倍;蛋白质组学数据分析发现,白浅灰链霉菌LBX-2 在以PE为唯一碳源培养48h和84h时,AlkB蛋白的表达量比在高氏一号培养基中分别上调了2.35 和1.57 倍,表明SaalkB基因可能是白浅灰链霉菌LBX-2 降解聚乙烯的关键基因.
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DOI
10.3969/j.issn.1001-8395.2023.06.012
发布时间
2023-09-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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